轉(zhuǎn)染是分子生物學(xué)中最常用的技術(shù)之一，也適用于基因治療的研究。基因治療中蛋白質(zhì)最大的功能和挑戰(zhàn)之一是為基因產(chǎn)物提供可靠的單特異性檢測(cè)試劑，尤其是抗體。因此，基于目標(biāo)靶蛋白的表達(dá)以及核酸質(zhì)粒的攝取，優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率尤為重要。過(guò)去，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染系統(tǒng)大多用于生產(chǎn)天然復(fù)合蛋白，這得益于高效轉(zhuǎn)染方案和懸浮細(xì)胞系在高水平生長(zhǎng)的可用性密度。對(duì)于瞬時(shí)表達(dá) ，主要應(yīng)用HEK-293和CHO-K1細(xì)胞系，這兩種細(xì)胞系均可適應(yīng)懸浮培養(yǎng) ，并且可獲得亞克隆 。

相對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染具有一個(gè)很大的優(yōu)勢(shì)：速度。在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染需要數(shù)周或數(shù)月的情況下，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染在數(shù)天內(nèi)完成，從而快速、可靠地獲得少量蛋白質(zhì)來(lái)用于實(shí)驗(yàn)。

我們發(fā)現(xiàn)了一種簡(jiǎn)單，快速和穩(wěn)健的流式電轉(zhuǎn)儀瞬轉(zhuǎn)法，可用作優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率的工具，實(shí)現(xiàn)瞬時(shí)表達(dá)的最佳途徑，耗時(shí)短、成本低、效率高，在蛋白藥物候選基因的構(gòu)建和篩選及抗體蛋白的小批量生產(chǎn)中具有很大的優(yōu)勢(shì)。這種流式電極技術(shù)在較低的電壓下即能產(chǎn)生足夠強(qiáng)度的均勻電場(chǎng)，可實(shí)現(xiàn)90%以上的轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞存活率，而且合理的設(shè)備及耗材成本也具有顯著的優(yōu)勢(shì)。

X-Porator F1 瞬轉(zhuǎn)體系介紹

流式電轉(zhuǎn)儀 X-Porator F1，在使用 CHO-S、293F 等細(xì)胞系反復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證后，形成了一套基于 ExpiCHO-S細(xì)胞的高表達(dá)電轉(zhuǎn)體系，為用戶提供了一套穩(wěn)定、高效的整體方案（包含國(guó)產(chǎn)培養(yǎng)體系）。目前，X-Porator F1瞬轉(zhuǎn)體系實(shí)現(xiàn)了克級(jí)蛋白表達(dá)量，將多家客戶瞬轉(zhuǎn)表達(dá)量較化轉(zhuǎn)提高了數(shù)倍至數(shù)十倍。

1、工作流程

▲X-Porator F1專(zhuān)用耗材安裝圖

?  將前一步細(xì)胞離心的離心管作為上樣容器，加入質(zhì)粒和電轉(zhuǎn)緩沖液；
?  將離心管與 F1 一次性耗材對(duì)接，并將全封閉耗材裝配到 F1 設(shè)備上；
?  通過(guò)蠕動(dòng)泵驅(qū)動(dòng)細(xì)胞懸液，細(xì)胞經(jīng)過(guò)電極芯片，在流動(dòng)狀態(tài)下完成電轉(zhuǎn)染并被后端離心管收集；
?  取出細(xì)胞液直接稀釋培養(yǎng)。

2、產(chǎn)品特點(diǎn)

▲X-Porator F1設(shè)備和專(zhuān)用耗材包

?  單次可電轉(zhuǎn) 1L 培養(yǎng)量的細(xì)胞；
?  高達(dá) 90%以上轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞存活率；
?  較化轉(zhuǎn)蛋白表達(dá)時(shí)間更短；
?  符合 GMP 標(biāo)準(zhǔn)的耗材；
?  X-Porator F1 設(shè)備參數(shù)可調(diào)整；
?  X-Porator F1 電轉(zhuǎn)適用于細(xì)胞原廠培養(yǎng)基的方案，也有國(guó)產(chǎn)培養(yǎng)基的替代方案；
? 與其它類(lèi)似電轉(zhuǎn)染設(shè)備比較，X-Porator F1 瞬轉(zhuǎn)體系具有顯著的成本優(yōu)勢(shì)。

結(jié)果節(jié)選

▲實(shí)測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)節(jié)選